SARS-CoV-2附属Beta冠状病毒属（Betacoronavirus），是一种基因组为正义单链RNA的包膜病毒。SARS-CoV-2感染细胞后，以自身RNA基因组为模板进行翻译，在胞浆中形成复制转录复合物（Replication transcription complex， RTC）并进一步复制病毒RNA[1]。面前对SARS-CoV-2的商讨发现该病毒的基因组可翻译出29种类型的病毒卵白。其中一些卵白在介导病毒基因组复制、病毒卵白激活、潜逃宿主免疫监测方面具有对应生物学功能，并因此成为商讨诊治SARS-CoV-2感染药物靶点的热点弃取。SARS-CoV-2的RNA基因组与病毒卵白SARS-CoV-2基因组可翻译出的卵白类型分裂为3大类：非结构卵白（Nonstructural protein）、结构卵白（Structural protein）和扶植卵白（Accessory protein）。其中非结构卵白的ORF序各位于基因组上游，结构卵白和扶植卵白的ORF位于基因组卑鄙。熟练的SARS-CoV-2主要由结构卵白和病毒RNA基因组构成，非结构卵白和扶植卵白在病毒投入细胞后通过病毒RNA基因组的翻译产生。非结构卵白由于非结构卵白对应的RNA基因组上存在一个茎环结构（Stem loop），核糖体在翻译时通过发生阅读框滑动（Frameshift）形成两个通达阅读框：ORF1a和ORF1b。对应的翻译居品为两种多聚卵白（Polyprotein）表情的多肽：pp1a和pp1ab。多聚卵白自身莫得功能，关联词NSP3和NSP5不错从多聚卵白上自水解并脱离，进一步将pp1a和pp1ab切割为熟练的非结构卵白。以下为这些非结构卵白的功能注视[2]：NSP1NSP1不错拦阻核糖体筹画宿主mRNA，关闭宿主自身卵白的合成旅途。NSP2可径直筹画宿主的抗增殖卵白1和（Prohibitin 1，PHB1）和抗增殖卵白2（Prohibitin 2，PHB2）。商讨臆想NSP2通过劫执PHB1和PHB2阻难细胞的自噬防护机制并龙套线粒体功能以有匡助病毒复制[3]。NSP3病毒的复制转录复合物均分子量最大的卵白。该卵白具有多个保守结构，其中木瓜样卵白酶（PLpro）结构域匡助NSP3从多聚卵白上水解开释，并对多聚卵白N端形成切割，产生零丁有功能的NSP1和NSP2。此外，NSP3还充任骨架卵白的变装，与NSP4、NSP6相互作用，促进具有双层膜囊泡（Double-membrane vesicle， DMV）结构的病毒复制细胞器（Viral replication organelle）形成[4]。NSP4、NSP6跨膜卵白，利用内质网的质膜介导DMV生成。NSP53CL卵白酶（3CLpro），也称为主卵白酶。3CLpro通过自水解将自身从多聚卵白开释，并对多聚卵白上的NSP4到NSP16对应区域进行切割使其各自形顺利能性卵白。用于诊治HIV感染的卵白酶靶向药物Lopinavir和Ritonavir，已被用于商讨是否可相似灵验作用于SARS-CoV-2的卵白酶[5]。NSP7、NSP8NSP7与NSP8构成十六聚体复合物，充任NSP12复制病毒RNA时的引物酶。NSP9二聚体表情的单链RNA筹画卵白，踏实病毒RNA。NSP10激活NSP16的2’-O-甲基滚动酶活性。NSP10同期亦然踏实NSP14核酸外切酶结构域的辅因子。NSP11功能未知NSP12RNA依赖的RNA团员酶（RNA-dependent RNA polymerase， RdRp），领有NSP7和NSP8两个辅因子，复制病毒RNA。Remdesivir即所以病毒RdRp为靶标而筹算的COVID-19诊治药物[6]。NSP13RNA解旋酶，NSP12复制病毒RNA时解开双链RNA所需。NSP14一种双功能的酶，具有3’-5‘核酸外切酶结构域（ExoN），增强病毒复制RNA时的校对智商。NSP14也具有N7-甲基滚动酶活性，修饰病毒RNA的5’鸟苷酸帽子，幸免病毒RNA被细胞识别为外源RNA而被降解。NSP15RNA核酸内切酶，不错降解病毒的RNA碎屑，减少其指导宿主细胞初始抗病毒谨防机制的可能。NSP16一种2’-O-甲基滚动酶，对病毒RNA的5’帽子进行甲基化修饰，幸免病毒RNA被细胞识别为外源RNA而被降解。结构卵白SARS-CoV-2是利用宿主的磷脂分子拼装的包膜病毒，此外领有四种结构卵白：S、E、M、N。冠状病毒名义的花冠外形起首于其包膜上S卵白刺突结构。以下为这些结构卵白的功能注视[2]：Spike (S)SARS-CoV-2的名义刺突卵白，识别宿主细胞名义ACE受体，介导病毒包膜与细胞膜和会，甚至病毒RNA基因组投入细胞内。S卵白突变与SARS-CoV-2变异株的感染智商增强密切相干，因此亦然无数中庸抗体的商讨靶点。Envelope (E)E卵白是病毒包膜上的序列高度保守的跨膜卵白。商讨觉得E卵白是一种病毒孔卵白（Virion），不错扯后腿细胞的离子浓度稳态，激活NLRP3炎性小体的生成[7]。Membrane (M)与病毒颗粒的拼装关连。M卵白与N卵白的筹画使得病毒RNP保执结构踏实[8]。Nucleocapsid (N)病毒翻译产生的数目最多的卵白类型，序列在冠状病毒中高度保守。N卵白筹画病毒RNA，拼装病毒时认真将线性的病毒基因组RNA包裹成紧密的螺旋表情的核糖核卵白（Ribonucleoprotein，RNP）复合体。扶植卵白除了编码非结构卵白和结构卵白外，SARS-CoV-2基因组还编码9种扶植卵白。商讨标明扶植卵白基因对冠状病毒复制猛烈必须的，可是其中一些扶植卵白不错匡助病毒抵抗宿主的病毒防护机制。以下为这些扶植卵白的相温雅释[2]：ORF3a动作离子通谈的病毒孔卵白，扯后腿细胞的钙离子浓度稳态，过度激活NLRP3炎性小体的生成，最终激勉细胞因子风暴[9]。ORF3b商讨标明ORF3b阻难插手素IFN-I的生成[10]。ORF6阻断插手素信号通路中的STAT1转录因子投入细胞核，从而拦阻参与固有免疫叮属相干的卵白抒发。ORF7aORF7a劫执细胞膜上的骨髓基质抗原2（Bone Marrow Stromal Antigen 2，BST-2），放松其夙昔功能。BST-2又称为Tetherin卵白，不错物感性地将正在出芽的包膜病毒拴在细胞膜上，减少感染细胞中的病毒颗粒开释[11]。ORF7b分散于高尔基体上的III型跨膜卵白，具体功能未知。ORF8SARS-CoV-2的ORF8不具备任何特定的结构域约略模     体，功能有待商讨。ORF9b、ORF9c该卵白的基因序列重迭于核衣壳卵白N的基因序列，卵白功能待进一步商讨。ORF10商讨标明该卵白对SARS-CoV2-2的复制猛烈必要的，具体功能有待商讨[12]。重组病毒卵白的东谈主工抒发载体家领有全面的重组卵白抒发与纯化时代平台，包括大肠杆菌抒发系统、酵母抒发系统、哺乳动物细胞抒发系统和杆状病毒-虫豸细胞抒发系统，可兴隆多种类型的病毒卵白商讨需求。使用大肠杆菌抒发系统大肠杆菌E. coli仍然是现时最世俗使用的重组卵白抒发系统。该系统的抒发载体通常遴荐T7噬菌体初始子，在含有T7 RNA团员酶的大肠杆菌中驱动基因高效抒发。在T7初始子卑鄙引入乳糖独揽子加多抒发调控功能，在添加IPTG后才会指导重组卵白的产生。由于大肠杆菌培养老本低、易放大、周期短，方向基因抒发水平高，稀薄是关于小分子量的病毒卵白，其抒发居品历程纯化结晶后常用于卵白质三维结构商讨。使用哺乳动物细胞抒发系统哺乳动物细胞如HEK293，动作一种真核卵白抒发系统，使用克隆有方向基因的基因抒发质粒载体转染细胞即可达成重组卵白抒发。利用哺乳动物细胞抒发重组病毒卵白最大的上风在于该系统不错尽可能模拟病毒卵白在被感染细胞中的骨子分子生物学活动。哺乳动物细胞提供齐备的翻译后修饰环境与卵白转运链，有助于重组卵白的正确折叠与夙昔生物学功能期骗。哺乳动物细胞抒发系统是面前商讨病毒卵白功能的常用器用，特备是在病毒-宿主卵白互作、卵白质组学分析与药物/抗体靶点商讨方面有着进犯应用。使用杆状病毒-虫豸细胞抒发系统杆状病毒-虫豸细胞抒发系统同为真核卵白抒发系统，对比哺乳动物细胞更得当需要无数抒发的应用。该系统的重组卵白历程细胞分泌，不错在培养基中获取终点高密度的重组卵白，成心于分离纯化。收货于虫豸细胞不错夙昔地为重组卵白进行磷酸化修饰，杆状病毒-虫豸细胞抒发系统常用于抒发激酶。该系统的另一个上风是无需使用动物源试剂，在幸免BSE方面安全性高，因此被世俗用于临床商讨，比如无数抒发用于抗体商讨的冠状病毒刺突卵白以及抗体自己的分娩。参考文件[1] Robson F， Khan KS， Le TK， Paris C， Demirbag S， Barfuss P， Rocchi P， Ng WL. 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